В недавнем исследовании, опубликованном в журнале PLoS Pathogens , исследователи изучали вероятные гуморальные иммунные механизмы, связанные с подавлением вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ), помимо нейтрализации, путем систематического акцента на функциональную активность кристаллизуемых (Fc) фрагментов антител (Ab) в течение курса лечения. ВЭБ-инфекции.

Фон

Исследования показали, что инфекции ВЭБ вызывают аутоиммунитет, такие инфекции, как инфекционный мононуклеоз (ИМ), посттрансплантационные лимфопролиферативные заболевания (ПТЛЗ) и злокачественные новообразования (лимфома Ходжкина (ЛХ), неходжкинская лимфома, карцинома носоглотки (НПК) и карцинома желудка). у значительной части человечества.

Таким образом, остро необходимы вакцины и другие иммунотерапевтические мероприятия для купирования ВЭБ-ассоциированной патологии. Предполагается, что нейтрализующие антитела (nAb) эффективны против EBV. Тем не менее, вакцино-индуцированные уровни nAb, нацеленных на гликопротеин (gp)350, не были доказаны.

Об исследовании

В настоящем исследовании исследователи охарактеризовали специфичность и Fc-функциональность антител против ВЭБ в течение инфекции ВЭБ (от острой до стадии выздоровления).

Ландшафт гуморального иммунологического ответа на ВЭБ был проанализирован среди студентов мужского (n = 6) и женского (n = 4) колледжа с симптомами ИМ в течение инфекции EBV. Сыворотки были получены от студентов в течение одного года, и для сравнения образцы сыворотки четырех человек с хроническими инфекциями EBV [C-EBV + : вирусный капсидный антиген-негативный (VCA) — иммуноглобулин М-отрицательный (IgM — ) IgG + , ранний антиген (EA) IgG — , ядерный антиген EB-1 (ENBA-1) IgG1 + ].

Наличие и состояние ВЭБ-инфекций определяли с помощью иммуноферментного анализа (ИФА), а количество В-лимфоцитов, инфицированных ВЭБ, оценивали с помощью количественной полимеразной цепной реакции (КПЦР). Кроме того, были проведены патоген-специфический анализ репертуара IgG (VirScan) и секвенирование следующего поколения (NGS).

Острые инфекции были подтверждены повышенными титрами VCA — IgM и незначительными титрами EBNA-1 IgG. Фаза хронического EBV была подтверждена незначительными VCA-IgM и повышенными титрами VCA-IgG и EBNA-1-IgG через 12–24 недели после включения (wpe). Тяжесть заболевания (SOI) оценивалась участниками самостоятельно на основе ограничений физической активности и интенсивности симптомов и боли.

Были количественно определены антиген-направленные ответы IgM и подклассы IgG IgG1 и IgG3 с преобладанием ответа. Выбранными антигенами были p18), p47/54, gp350/220 и EBNA-1. Кроме того, для справки были включены три сезонных вакцины против гриппа гемагглютинина 1 (HA1) с 2014 по 2015 год. Для изучения функциональности Ab-опосредованного Ab-зависимое отложение комплемента (ADCD) исследовали с использованием проточной цитометрии (FC). Исследования истощения проводили путем удаления IgG или IgM, нацеленных на антиген, из сыворотки в острой фазе, чтобы идентифицировать класс Ab, ответственный за p18-ADCD.

Далее исследовали роль Ab-зависимого клеточного фагоцитоза моноцитами (ADCP) или нейтрофилами (ADNP). Способность антиген-специфических антител EBV взаимодействовать с гамма-рецепторами Fc (FcgR) оценивали с помощью мультиплексного анализа FC для оценки вероятного влияния эффективности связывания FcgR антител, нацеленных на EBV, на Fc-опосредованную функциональность. Наконец, функциональные профили антител при острых инфекциях, вызванных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), сравнивали с таковыми при острых инфекциях ВЭБ.

Полученные результаты

Средний возраст исследуемой когорты составил 22 года. У трех студентов были обнаружены признаки ранней реактивации ВЭБ (EA — рост IgG после предыдущего ослабления сигнала) в период с 12 до 24 недель в неделю. У всех участников наблюдались тяжелые симптомы ИМ в острой фазе EBV (средний балл SOI при нулевом wpe составлял 4,5); тем не менее, большинство из них были бессимптомными в четырех wpe.

Титры анти-EBV IgM вырабатывались во время острой фазы ИМ, но быстро снижались. За пределами четырех wpe титры только p47/54- и p18-мишеней IgM стабильно выявлялись, а антигены p47/54 и p18 доминировали в ответах IgM (медианные пики IgM в мкг для p18, p47/54, gp350/220 и EBNA-1 были 55, 113;

Титры IgG1, нацеленные на ВЭБ, были значительно ниже, чем антитела, нацеленные на вирус гриппа HA1. Ответы IgG3 были обнаружены в первую очередь для p47/54 и p18. Оба антигена EBV преобладали в подклассе IgG3 (средний пик мкг эталонного IgG3 для p18, p47/54, gp350/220, EBNA-1 и гриппа HA1 составлял 6,1, 23, 2,2, 2,4 и 30 соответственно. Доминировали подклассы IgG3 и IgG1. активная и латентная фазы соответственно.  

ADCD опосредуется p18 исключительно в острой фазе; однако количество антител, специфичных для p18, со временем уменьшалось. IgM, но не истощение IgG, вызывало потерю активности ADCD, что указывает на то, что IgM опосредовал p18-ADCD при инфекциях EBV, но p18-ADCD не сохранялся в хронической фазе. Частота геномов ВЭБ/10 6 В-лимфоцитов снижалась по мере течения инфекции.

Функции антител против двух ранних (p47/54 и p18) и латентных (EBNA-1 и gp350/220) антигенов EBV были умеренными и недолговечными, что отличалось от гуморальных ответов, индуцируемых при острых ВИЧ-инфекциях. Через год после инфицирования p18 индуцировал сильное IgM-опосредованное отложение комплемента и IgG-опосредованный фагоцитоз. Ответы ADNP, опосредованные антителами против p18, продолжались ≥12 месяцев, а опосредованная EBV-Ab активация естественных киллеров (NK) была обнаружена в хронической фазе.

В острую фазу наблюдалась неоднородная картина ответа, которая различалась у разных людей и была шире после 24 wpe. Отсутствие надежной и широкой индукции Fc-функциональности при антигенной специфичности EBV не было результатом общей неспособности EBV индуцировать расширяющиеся гуморальные ответы. Анти-p18-Ab-опосредованные функции Fc и анти-EBV IgM коррелировали с показателями SOI, что свидетельствует о потенциальной роли Fc-опосредованных функций в модификации заболевания при инфекциях EBV.

Вывод

В целом, результаты исследования показали уклонение от ВЭБ за счет сильной индукции Fc-функциональных антител, вероятно, из-за перехода от острой стадии к латентной во время инфекции ВЭБ, что, вероятно, делает возможной стойкую и пожизненную инфекцию с последствиями инфекции ВЭБ.